La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) es una cromatografía en columna que bombea una mezcla de muestra o analito en un disolvente (fase móvil) a alta presión a través de una columna que contiene material de envasado cromatográfico (fase estacionaria).
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En este método, la muestra es transportada por una corriente de gas helio o nitrógeno en movimiento. Con la técnica de cromatografía líquida de alto rendimiento, es posible separar e identificar los compuestos que se encuentran en cualquier muestra que sea soluble en un líquido en concentraciones de trazas tan bajas como partes por billón. Gracias a su versatilidad, esta técnica se utiliza en una variedad de aplicaciones industriales y científicas, como la farmacéutica, ambiental, forense y química.
El tiempo de retención de la muestra varía en función de la interacción entre la fase estacionaria, las moléculas analizadas y el disolvente o disolventes utilizados. A medida que la muestra pasa por la columna, interactúa a diferentes velocidades entre las dos fases, principalmente debido a las diferentes polaridades de los analitos. Los analitos que tienen la menor cantidad de interacción con la fase estacionaria o la mayor cantidad de interacción con la fase móvil salen de la columna más rápido.
Los componentes principales de un sistema de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) son: depósito de disolvente o depósitos múltiples, una bomba de alta presión, columna, sistema de inyección y detector.
En pocas palabras, la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) es una técnica analítica para separar los componentes de una mezcla orgánica que no es volátil, es térmicamente inestable y tiene pesos moleculares relativamente altos. En este método, una corriente de vehículo líquido llamada fase móvil transporta la muestra inyectada a través de la columna de separación y al detector En la columna de separación, los componentes individuales se separan de acuerdo con interacciones fisicoquímicas. Los componentes separados son detectados por el detector dependiendo de la absorción de luz o cambios en el índice de refracción, cambios electroquímicos o de conductividad, o simplemente la distribución de tamaño de las moléculas separadas.
La salida del detector es monitoreada y evaluada por el software operativo que no solo realiza los cálculos necesarios, sino que también admite el volumen de inyección, la secuencia de inyección, la longitud de onda de detección, los ciclos de lavado y parámetros operativos similares. Las funciones avanzadas del software que se utiliza hoy en día han hecho que estos procesos sean extremadamente fáciles de usar. La mayor parte del tiempo empleado por un usuario es la preparación de la etapa móvil, la preparación de búferes y estándares, y las entradas de registro.
Las ciencias de la separación han contribuido en gran medida al crecimiento y la comprensión de la química analítica y los controles de la calidad de los productos de consumo, como productos farmacéuticos, alimentos y bebidas, polímeros y control ambiental. Esto se debe principalmente a las técnicas cromatográficas y la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC).
La cromatografía en general, y la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) en particular, hacen contribuciones notables a la investigación y el desarrollo de productos. La cromatografía líquida de alto rendimiento encuentra una amplia aplicación en productos farmacéuticos, alimentos, investigación bioquímica, polímeros sintéticos, estudios biomoleculares y monitoreo ambiental. El alcance de este método está aumentando a un ritmo sorprendente. La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), una técnica popular en los laboratorios modernos, sigue ganando una amplia aceptación.
Esta técnica permite analizar una muestra en una amplia gama de concentraciones y pesos moleculares. Los análisis se realizan tradicionalmente utilizando diferentes tamaños de columna y modos de funcionamiento para cantidades de muestra que van desde picogramos hasta cantidades a nivel de gramo. Los avances en el campo de los polímeros sintéticos y las grandes biomoléculas han resultado de las capacidades de este método.
La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) es la forma de cromatografía líquida generalmente utilizada en la industria farmacéutica, ya que proporciona los resultados precisos requeridos. Los resultados se utilizan para analizar cuantitativa y cualitativamente los productos e ingredientes farmacéuticos terminados en el proceso de fabricación. Esta técnica se utiliza para separar, cuantificar y definir componentes en una mezcla. La técnica de HPLC también se utiliza para revelar la identidad de un fármaco y para controlar el progreso del tratamiento de una enfermedad. Anteriormente se esperaba que se usara como método complementario para la cromatografía de gases, pero la industria farmacéutica ahora usa la técnica HPLC solo como técnica cromatográfica. Uno de los principales beneficios de esta técnica es su capacidad para explicar la estructura y cuantificar las impurezas en las formulaciones farmacéuticas. Esta técnica es particularmente adecuada para compuestos que no son fácilmente volátiles, térmicamente inestables y tienen altos pesos moleculares.
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